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蛋白質印跡手冊16:狹縫印跡操作詳解[創新技巧]

【字體: 時間:2014年08月01日 來源:默克密理博

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  下列操作介紹了將蛋白質過濾到Immobilon® PVDF轉印膜的標準步驟。關于更多信息,請查看您的轉印系統附帶的操作指南。

下列操作介紹了將蛋白質過濾到Immobilon® PVDF轉印膜的標準步驟。關于更多信息,請查看您的轉印系統附帶的操作指南。

提示:去污劑可能抑制蛋白質與Immobilon® PVDF轉印膜的結合。

建議 – 粘稠的樣品必須用緩沖液稀釋,以降低粘稠度。

必需的設備和溶液
• 兩張Immobilon® PVDF轉印膜,切成轉印裝置的大小。
• 濾紙,切成轉印裝置的大小。
• 甲醇,100%
• Milli-Q® 水
• 緩沖液,用于上樣和清洗。
• 轉印裝置,斑點印?;螄練煊〖P問?。

準備
1. 準備膜。
a. 將膜在甲醇中浸泡15秒。膜應均勻地從不透明變成半透明。
b. 小心將膜放入Milli-Q® 水中,浸泡2分鐘。
c. 小心將膜放入緩沖液中,至少平衡5分鐘。
2. 將樣品溶解在緩沖液中。如果樣品溶液混濁,離心以去除顆粒。如果樣品粘稠,用更多緩沖液稀釋。

轉印裝置的組裝
關于詳細的組裝說明,請參看制造商的操作指南。
1. 將一張濕潤的濾紙放在裝置上。一些裝置可能需要多張。
2. 將兩張膜放在濾紙上面*。
3. 蓋上裝置。
4. 連接真空管。

蛋白質轉印
1. 短暫施加真空,以去除多余的緩沖液。
2. 關閉真空,小心將樣品加入孔中。
3. 在轉印裝置上施加真空。
4. 當所有樣品濾過膜時,關閉真空。
5. 在每孔中加入緩沖液,以清洗周圍。施加真空,讓清洗緩沖液濾過。
6. 當所有清洗緩沖液濾過膜時,關閉真空。
7. 若要取出印跡,打開印跡裝置。
8. 用鑷子小心取出轉印膜。

立即索取印刷版《蛋白質印跡手冊》

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